ÉTALEMENT DE CRACHAT

Les crachats doivent être considérés comme hautement contaminants, il est conseillé de se fabriquer un petit écran derrière lequel on pourra se protéger.
Attention : Le matériel biologique manipulé est hautement contaminable : Éviter tout courant d'air jusqu'au séchage complet des lames. Il est conseillé de manipuler le soir avant de fermer le laboratoire et de laisser sécher la nuit quand le labo est vide.
Il est conseillé de lire tout d'abord le chapitre consacré aux prélèvements de crachats.

Principe :
Confection d'un frottis mince des zones les plus significatives du crachat, en vue du diagnostic de la tuberculose pulmonaire. On peut aussi réaliser des étalements de crachat pour rechercher des champignons filamenteux (Aspergillus) ou pour confirmer une pneumonie bactérienne.

Matériel :
Lames neuves et propres, flambées elles aussi juste avant l'étalement, pipette Pasteur coupée courte (juste au dessous de la partie évasée), poire, masque de protection, lunettes et gants.
Éviter au maximum l'utilisation d'une öse : il y a formation d'aérosols de bactéries vivante à chaque passage dans la flamme lorsque l'öse n'est pas chauffée progressivement, en commençant 5-8 cm avant l'extrémité.

Mode opératoire :
Le choix de la parcelle à étaler a une importance capitale : on prélèvera de préférence le pus ou à défaut le mucus.
Lorsque l'on a pas l'habitude, on peut s'aider en posant la boite à crachats translucide sur un fond noir, les petites particules de pus se détachent plus facilement.
Prélever le pus avec la pipette Pasteur coupée courte puis le déposer sur la lame par de petits mouvements de va et vient afin d'étaler le crachat sur les 2/3 de la lame.

Stérilisation progressive de l'öse (Sindou 1999)

Le frottis ne doit pas être trop épais, il sera illisible ; il ne doit pas être trop fin, ce qui diminuerait les chance de trouver le bacille par la suite.
Il est déconseillé de procéder par écrasement standard violent, ce qui a tendance à projeter des gouttelettes de crachats dans la pièce.
Cependant on peut uniformiser l'épaisseur de l'étalement avec une deuxième lame sans trop appuyer pour éviter les projections.
Les lames sont ensuite soigneusement séchées à l'air libre pendant au moins 12 heures, protégées des insectes par une petite cage en moustiquaire (si possible métallique donc stérilisable). Il est bon de pouvoir les chauffer un peu pendant le séchage (60-70°).
Si le frottis n'est pas parfaitement sec, il se décollera à la coloration. Il peut sembler sec en surface et pourtant ne pas l'être au niveau de la lame. Si vos frottis se décollent, laissez les sécher 24 ou 36 heures de plus.
On peut ensuite colorer les lames d'étalement refroidies par la technique de Ziehl

Attention : Une lame comportant des BK reste contagieuse après séchage et même après coloration ! Il faut donc tout d'abord les désinfecter avec de la Javel avant de les incinérer.