coloration de Weber (microsporidies)

COLORATION DE WEBER

dernière modification le 02/18/2006

La coloration de Weber ou coloration au trichrome modifié, est utilisée pour la recherche des microsporidies dans les selles. Cette coloration, de réalisation difficile, est assez chère. Elle ne fait pas partie des analyses de première nécessité. Cependant, étant donné l'augmentation vertigineuse du nombre des personnes VIH positives dans les pays en développement, la recherche des microsporidies peut être utile au clinicien.

Mode opératoire :

• Diluer 1 volume de selle dans 2 volumes de formol à 10 %, bien mélanger.
• Étaler sur une lame, au besoin en plusieurs fois, au minimum 5 ml de cette dilution puis laisser sécher.
• Immerger les lames pendant 90 minutes dans le colorant de Weber.
• Rincer 10 secondes avec un mélange d'acide alcool (200 µl d'acide acétique + 44 ml d'alcool à 90°).
• Tremper les lames 5 minutes dans de l'alcool à 95°.
• Tremper les lames 10 minutes dans de l'alcool absolu.
• Tremper les lames 10 minutes dans du xylène.
• Laisser sécher à l'air

Colorant de Weber : les réactifs doivent être commandés spécialement au producteur. On peut cependant essayer de "s'arranger" avec un laboratoire spécialisé dans les analyses à destination des personnes VIH positives.

Dans un flacon de 125 ml, mélanger :

• 6 grammes de chromotrope 2R (Harleco, Gibbstown, N.J., USA)
• 150 mg de Fast green (Allied Chemical and Dye, New York, USA)
• 0.7 gramme d'acide phosphotungstique
• 3 ml d'acide acétique glacial.

Laisser reposer ensuite pendant 30 minutes puis ajouter 100 ml d'eau distillée.