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biologie

biologie

techniques de laboratoires pour laboratoire de brousse

NUMÉRATION DES RÉTICULOCYTES

La numération des réticulocytes permet de classer les anémies en régénératives et arégénératives. Il faut aussi procéder à une numération des érythrocytes.

Taux normal : 0,5 pour 100 globules rouges soit 40 000 à 50 000/mm3

Le taux de réticulocytes peut augmenter jusqu’à 50 % des globules rouges au cours des régénérations intenses

Principe :


Les réticulocytes sont des globules rouges jeunes contenant encore quelques granules ou filaments d'ARN. La coloration au bleu de crésyl fait apparaître ces éléments colorés en bleu foncé, facilement différentiable de la coloration bleue-verte plus claire des corpuscules sphériques contenant de l'HbH.

Prélèvement :


Pratiquer un prélèvement au bout du doigt ou sur sang recueilli sur EDTA

Réactif au Bleu de Crésyl brillant

Bleu de Crésyl brillant 1g

Citrate de Na 0,4g

Sérum physiologique (eau distillée à 9g/l de Nacl) 100ml

Faire dissoudre à chaud. Filtrer soigneusement et conserver au réfrigirateur.

Remarque : le citrate de sodium est utile si on prélève au bout du doigt

On peut remplacer le bleu de Crésyl brillant par du bleu de méthylène pur

Technique :

  • Mélanger dans un petit tube à hemolyse 5 gouttes de sang total et 5 gouttes de réactif.
  • Boucher avec un coton et laisser 30 minutes à température ambiante ou 10 mn à l’étuve à 37°
  • Remettre en suspension et effectuer un ou 2 frottis très fins et réguliers

Numération :

On compte le nombre de réticulocytes (contenant des granulations et filaments violet foncé) pour le nombre d’hématies et on exprime le résultat en nombre de réticulocytes pour 100 hématies

Pour cela : repérer une partie de frottis homogène au grossissement moyen. Passer à l’immersion et compter exactement le nombre d’hématies et de réticulocytes dans ce champ.

On examine ensuite les champs immédiatement situés en haut, en bas, à droite , à gauche en ne comptant que les réticulocytes et en consignant le nombre de globules rouges du champ primitif

Rendre le résultat obtenu pour 100 hématies

On multiplie ensuite le pourcentage obtenu par le nombre total d'érythrocytes par mm3 pour obtenir la valeur absolue des réticulocytes.

Exemple on a trouvé 5 réticulocytes pour 100 globules rouges

La numération des hématies est de 3 500 000/mm3

La valeur absolue des réticulocytes est de

5 x 3 500 000

------------------ = 175 000/mm3

100

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