Dosage de l’hémoglobine

4 Janvier 2016

Prélèvement :

Soit sur sang veineux prélevé sur anticoagulant (héparine, EDTA) et dilution au 1/250ème (0,2 ml de sang dans 50ml de Drabkin dilué ; fiole jaugée)

- Soit au bout du doigt : 0,02ml de sang total (20μl) que l’on souffle dans 5ml de Drabkin dilué

Solution de Drabkin concentrée (solution mère concentrée 50 fois)

Ferricyanure de potassium 10 grammes TOXIQUE

Cyanure de potassium (KCN) 2,5 grammes TOXIQUE

Phosphate monopotassique 7 grammes

Eau distillée q.s.p 1 litre

Solution fille de Drabkin dilué :

Obtenue en diluant la précédente au 1/50ème (dans fiole jaugée : 1ml de Drabkin concentré et 49ml d’eau distillée) à co anserver au frigidaire

Technique

Dosage :

-Réactif concentré à diluer au 1/50

-

BLANC

ETALON

DOSAGE

REACTIF

2.5 ml

ETALON

10 ul

SANG TOTAL

10 ul

Agiter ; attendre 20 minutes

Centrifugation

Lecture à 530 nanomètres contre le réactif seul ; se reporter à la courbe d’étalonnage pour en déduire la concentration de l’échantillon.

Etalonnage : à partir d’une solution aqueuse d’étalon d’hémoglobine à 0,50 g/100ml. Cette solution se conserve une huitaine de jours à +4°C

Dans une série de tubes à essais, introduire :

Tubes n°

témoin

réactifs

1

2

3

4

Solution d’hémoglobine à 0,50 g/100ml

-

0,2

0,4

0,6

0,8

Drabkin dilué

5

4,8

4,6

4,4

4,2

Hémoglobine en g/100ml

-

5

10

15

20

Hémoglobine en mmol/l

-

3,1

6,2

9,3

12,4

Agiter ; attendre 20 minutes avant de faire la lecture ; tracer la courbe d’étalonnage. Si possible, pour chaque série de mesures, établir un point de gamme.

Interprétation

Valeurs habituelles : hommes : 8 à 11 mmol/l ou 13 à 17,5 g/100ml

femmes :7,4 à 9,9 mmol/l ou 12 à 16 g/100ml

mmol/l x 16,114= g/l

Variations pathologiques :

Augmentation : hémoconcentration ( chocs, brûlures, diarrhées), polyglobulies

Diminution : anémies

Pour différencier le type d’anémie, il est nécessaire de pratiquer également la numération des globules rouges, le volume globulaire moyen (V.G.M.), la concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine (C.C.M.H.). Ces mesures permettent de classer les anémies en

Anémies hypochromes ou microcytaires : V.G.M.≤ 75 femtolitres ( ou μm 3), C.C.M.H.≤ 32%

Anémies macrocytaires : V.G.M.> 95 femtolitres

Anémies normochromes normocytaires : V.G.M. et C.C.M.H. normaux

Constantes érythrocytaires en fonction des unités le plus souvent exprimées

Hte=Hématocrite en %

Hb=Hémoglobine en g/100ml

GR=Globules rouges ou Hématies en Téra/Litre

Le Volume Globulaire moyen : c’est le volume occupé par une hématie

Calcul du VGM : Volume globulaire moyen en femtolitre (fl) ou μ3

Hte

VGM = ------------------ X 10

GR

Normale : de 85 à 95 μ3 ou fl

Microcytose < à 85 μ3

Macrocytose > à 95μ3

La Teneur moyenne en hémoglobine : c’est la quantité d’hémoglobine par hématie

Calcul de la TGMHB : Teneur globulaire moyenne en hémoglobine en picogrammes (pg)

Hb

TGMHB = -------------- X 10

GR

La Concentration Corpusculaire en Hémoglobine ou CCMHB : c’est le pourcentage de saturation des hématies en hémoglobine : les hématies étant normalement saturées en hémoglobine, la CCMHB ne peut être supérieure à la normale

Calcul de la CCMHB : concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine exprimée en % :

Hb

CCMHB = -------------- X 100

Hte

Globules rouges ou Hématies : 4.500.000 /mm 3 = 4,5 x 106 /mm3 = 4,5 x 109/cm3

= 4,5 x 1012/dm3 = 4,5 Téra/litre

Globules blancs ou leucocytes : 7.000/mm3 = 7 x 103/mm3 = 7 x 106/dm3= 7 Giga/litre